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Cassification
氮是烤煙生長(zhǎng)過程中重要的營(yíng)養(yǎng)元素之一,通過生化培養(yǎng)箱低溫培養(yǎng)與研究得出:在烤煙吸收的氮營(yíng)養(yǎng)中,60% 以上來自于土壤,肥料氮僅占總氮量的35% 左右,因此,提高土壤供氮量對(duì)烤煙獲得高產(chǎn)具有重要的實(shí)踐意義。自生固氮菌是一類生活在土壤有機(jī)質(zhì)中促進(jìn)植物生長(zhǎng)的根際細(xì)菌。本試驗(yàn)篩選出的固氮菌都屬于自生固氮菌,均為桿菌。蘇云金芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌都是具有固氮功能的細(xì)菌。
N7 的16S 序列與Bacillus megaterium 相似性達(dá)到98%,可推斷這個(gè)菌株是巨大芽孢桿菌。巨大芽孢桿菌是一種益生菌,在20 世紀(jì)40 年代,巨大芽孢桿菌就已進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,學(xué)者Sundar、Molla 以及Ellott 等發(fā)現(xiàn)以巨大芽孢桿菌為核心制成混合菌劑,可降解難以溶解的含磷化合物。1958 年Hin 在日本分離得一株具有高固氮活性的巨大芽孢桿菌,相對(duì)于生物肥料來說,巨大芽孢桿菌具有自身*的優(yōu)良特點(diǎn),其生存能力及適應(yīng)能力較強(qiáng),對(duì)于在非人工氮素供應(yīng)上這類菌株將起著十分重要的作用。巨大芽孢桿菌不僅具有高效降解煙草中亞硝酸鹽的功能,更有研究表明由巨大芽孢桿菌制成的微生物制劑噴灑在煙草葉片上,能有效的提高葉片的香味,并且降低蛋白質(zhì)含量,對(duì)煙草的品質(zhì)有很大提高。并且巨大芽孢桿菌與節(jié)桿菌雙菌種共同作用能有效提高廢次煙葉的綜合利用和煙草薄片質(zhì)量,這對(duì)煙草企業(yè)有巨大的經(jīng)濟(jì)意義。
N2、N5、N6、N9、N10 的16S 序列與Bacillussubtilis 相似性達(dá)到98%,由此可推斷這幾個(gè)菌株是枯草芽孢桿菌??莶菅挎邨U菌是一種益生菌,不僅能夠提高植物種子的發(fā)芽率,更具有固氮活性。目前有研究表明,枯草芽孢桿菌是一種內(nèi)生固氮菌,定殖在宿主植物體內(nèi),直接分泌固氮產(chǎn)物給植物吸收,不易受到外界環(huán)境條件的干擾,更有利于充分發(fā)揮固氮效能,表現(xiàn)出更高的固氮效率。在甘蔗內(nèi)生固氮菌的研究中,證實(shí)了枯草芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌的高效固氮活性。English 等研究顯示,煙葉分別或混合接種枯草芽孢桿菌和環(huán)狀芽孢桿菌后,能迅速產(chǎn)生一種令人愉悅的香氣。并且研究表明利用枯草芽孢桿菌還可以高效防治煙草青枯病。N1 的16S 序列與Bacillus thuringiensis 相似性達(dá)到99%,由此可推斷該菌為蘇云金芽孢桿菌。蘇云金芽孢桿菌不僅常用作微生物殺蟲劑,也具有高效固氮功能。N4、N8、N12 的16S 序列與Bacillusmethylotrophicus 相似性達(dá)到99%,由此可推斷這幾個(gè)菌是甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌,具有高效固氮功能。但是目前對(duì)蘇云金芽孢桿菌和甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌的固氮功能研究相對(duì)較少,這兩個(gè)菌種的固氮活性需要做進(jìn)一步的研究。ARDRA 的分析結(jié)果大致一致,證實(shí)了我們分類的正確性。
本試驗(yàn)對(duì)巨大芽孢桿菌的適宜培養(yǎng)條件、適pH 值等進(jìn)行了研究。把蔗糖作為N7 的碳源進(jìn)行下一步的研究。與蔗糖相比,葡萄糖屬于單糖,一般較容易被細(xì)菌利用,但在其代謝過程中產(chǎn)酸速度較快,從而使得培養(yǎng)基pH 值快速降低,這可能是導(dǎo)致其生長(zhǎng)量較蔗糖低的主要原因。N7 快速生長(zhǎng)的初始pH 值為7.50,菌株在中性或偏堿性的條件下生長(zhǎng)好,這與文獻(xiàn)報(bào)道的植物生長(zhǎng)促生菌的適宜培養(yǎng)條件一致。在低溫培養(yǎng)中,N7 的適生長(zhǎng)溫度是30℃,可能是由于較低的溫度(25℃),菌體新陳代謝較慢,導(dǎo)致菌生長(zhǎng)和分裂速度受影響;較高的溫度(40℃),由于該溫度超過了菌體內(nèi)酶的適溫度,使得其催化效率有所下降,從而影響了細(xì)菌的生長(zhǎng)。
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